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引用本文:   李德文, 杨超, 付金颖, 刘英, 于莉莉, 付玉杰. 一种改良的红豆杉成熟针叶总RNA提取方法. 分析化学, 2018, 46(9): 1379-1385. doi:  10.11895/j.issn.0253-3820.171456 [复制]

Citation:   LI De-Wen, YANG Chao, FU Jin-Ying, LIU Ying, YU Li-Li, FU Yu-Jie. A Modified Method for Total Ribonucleic Acids Extraction from Taxus Chinensis Needles. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2018, 46(9): 1379-1385. doi: 10.11895/j.issn.0253-3820.171456 [复制]

一种改良的红豆杉成熟针叶总RNA提取方法

通讯作者:  刘英, amivel00@163.com

收稿日期: 2017-11-27

接受日期: 2018-05-20

出版日期: 2018-09-01

基金项目: 本文系十三五国家重点研发计划(No.2017YFD0601306)、中央高校基本科研业务费专项资金项目(Nos.2572015CA07,2572015CA03)和黑龙江省自然科学基金项目(No.QC2017009)资助

A Modified Method for Total Ribonucleic Acids Extraction from Taxus Chinensis Needles

Corresponding author:  LIU Ying, amivel00@163.com

Received Date:  2017-11-27

Accepted Date:  2018-05-20

Published Date:  2018-09-01

Fund Project:  This work was supported by the National Key Research and Development Program of China (No. 2017YFD0601306), the Fundamental Research Funds for the Central Universities (Nos. 2572015CA07, 2572015CA03) and the Heilongjiang Province Natural Science Fund Project (No. QC2017009)

红豆杉(Taxus chinensis(Pilger)Rehd.)是一种重要的药源植物,根据红豆杉针叶特点,本研究提出改良RNA提取方法,即十六烷基三甲基溴化铵-氯化锂(CTAB-LiCl)联用法,以红豆杉的幼嫩、成熟针叶为材料,采用TRIzol法提取RNA,结果表明,TRIzol法提取嫩针叶中的RNA质量完整,成熟针叶中的RNA质量不完整;针对成熟针叶采用CTAB法、SDS-酚法和改良的CTAB-LiCl法提取RNA,并进行了质量验证比对显示,CTAB法和SDS-酚法提取的RNA质量差,并存在不同程度的多糖、多酚和DNA污染,改良CTAB-LiCl联用法提取红豆杉成熟针叶的RNA质量完整,A260/A280比值在1.9~2.0之间,RNA产率最高,分别为CTAB法和SDS-酚法提取的RNA产率的1.37和1.24倍。进一步反转录后,利用特异性引物进行扩增验证,发现扩增的片段条带清晰,片段大小符合预期。成熟针叶中高质量的RNA更有利于红豆杉分子生物学方面的深入研究。

关键词:   红豆杉, RNA提取, 十六烷基三甲基溴化铵-氯化锂法, 成熟针叶
Key words:   Taxus chinensis, Extraction of ribonucleic acid, Cetyl trimethyl ammonium bromide-LiCl method, Mature needles
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一种改良的红豆杉成熟针叶总RNA提取方法

李德文, 杨超, 付金颖, 刘英, 于莉莉, 付玉杰

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