会员登陆: 用户名:  密码: 验证码:
首页 杂志概况 投稿须知 在线投稿 在线阅读 征订启事 广告服务 行业资讯 企业动态 资料中心  专访报道 会展信息 ENGLISH

引用本文:   程炜, 占方玲, 李水明, 杨静波, 王勇, 刘宁. 基于不同沉淀方法检测小鼠心脏组织中S-棕榈酰化蛋白. 分析化学, 2019, 47(1): 30-37. doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.181619 [复制]

Citation:   CHENG Wei , ZHAN Fang-Ling , LI Shui-Ming , YANG Jing-Bo , WANG Yong , LIU Ning . Detection of S-palmitoylated Proteins in Mouse Heart Tissue Based on Different Precipitation Methods. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2019, 47(1): 30-37. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.181619 [复制]

基于不同沉淀方法检测小鼠心脏组织中S-棕榈酰化蛋白

收稿日期: 2018-09-28

基金项目: 本文系国家自然科学基金项目(No.81472030)和吉林省科技厅项目(No.20180101267JC)资助

Detection of S-palmitoylated Proteins in Mouse Heart Tissue Based on Different Precipitation Methods

Received Date:  2018-09-28

Fund Project:  This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (No.81472030) and the Jilin Province Science and Technology Department (No.20180101267JC)

酰基-生物素置换法(Acyl-biotinyl exchange,ABE)是利用生物素取代棕榈酸,进而对棕榈酸修饰的蛋白进行标记检测的方法,是检测S-棕榈酰化蛋白质的常用方法。本研究比较了ABE法中丙酮沉淀与甲醇-氯仿沉淀两种方法对S-棕榈酰化蛋白检测的影响,并对小鼠心脏组织中S-棕榈酰化修饰蛋白进行整体分析,进一步丰富S-棕榈酰化蛋白质的相关研究。首先用N-乙基马来酰亚胺(NEM)对小鼠心脏组织中蛋白质分子上的游离巯基进行封闭,再利用巯基反应性生物素化试剂(HPDP-Biotin)对羟胺(HA)切割后新产生的半胱氨酸巯基进行生物素标记,可检测出小鼠心脏组织中S-棕榈酰化修饰的蛋白。在此反应过程中,均通过蛋白沉淀法除去未反应的NEM、HA及HPDP-Biotin。基于不同沉淀方法对小鼠心脏组织总蛋白中的S-棕榈酰化蛋白进行标记后,利用链霉亲和素修饰琼脂糖珠对已标记上生物素的S-棕榈酰化蛋白进行富集,利用质谱检测分析。本研究共鉴定出50种S-棕榈酰化蛋白,其中丙酮沉淀实验组鉴定出23种S-棕榈酰化蛋白,甲醇-氯仿沉淀实验组鉴定出37种S-棕榈酰化蛋白,两组均鉴定出的蛋白有10种,不同的沉淀方法交叉互补使用可使鉴定结果更加丰富、可靠。

关键词:   心脏, S-棕榈酰化蛋白, 沉淀, 质谱
Key words:   Heart, S-Palmitoylated protein, Precipitation, Mass spectrometry
[1]

Lee M, Jordi F. J. Biol. Chem.,1951,191:807-817

[2]

Schmidt M F, Bracha M, Schlesinger M J. Proc. Natl. Acad. Sci. USA,1979,76(4):1687-1691

[3]

Paige L A, Nadler M J S, Harrison M L, Cassady J M, Geahlen R L. J. Biol. Chem.,1993,268(12):8669-8674

[4]

Kong E, Peng S, Chandra G, Sarkar C, Zhang Z, Bagh M B, Mukherjee A B. J. Biol. Chem.,2013,288(13):9112-9125

[5]

Wei X C, Song H W, Semenkovich C F. Arter.Thromb Vasc. Biol.,2014,34(2):346-354

[6]

Dowal L, Yang W, Freeman M R, Steen H,Flaumenhaft R. e-Blood,2011,118(13):62-73

[7]

Sanders S S, Martin D D O, Butland S L, Lavallée-Adam M, Calzolari D, Kay C, Yates J R, Hayden M R. PLoS Comput. Biol.,2015,11(8):1-20

[8]

Pinner A L, Tucholski J, Haroutunian V, Mc Cullumsmith R E, Meador-Woodruff J H. Schizophr. Res.,2016,177(1-3):78-87

[9]

Wan J M, Savas J N, Roth A F, Sanders S S, Singaraja R R, Hayden M R, Yates J R, Davis N G. Chem. Biol.,2013,20:1421-1434

[10]

Lanyon-Hogg T, Faronato M, Serwa R A, Tate E W. Trends Biochem. Sci.,2017,42(7):566-581

[11]

Runkle K B, Kharbanda A, Stypulkowski E, Cao X J, Wang W, Garcia B A, Witze E S. Mol. Cell,2016,62(3):385-396

[12]

Pei Z, Xiao Y, Meng J, Hudmon A, Cummins T R. Nat. Commun.,2016,7:1-13

[13]

Zhou T, Li J, Zhao P, Liu H, Jia D, Jia H, He L, Cang Y, Boast S, Chen Y H, Thibault H, Scherrer-Crosbie M, Goff S P, Li B. Proc. Natl. Acad. Sci. USA,2015,112(51):15666-15671

[14]

Wan J, Roth A F, Bailey A O, Davis N G. Nat. Protoc.,2007,2(7):1573-1584

计量
  • PDF下载量(63)
  • 文章访问量(315)
  • HTML全文浏览量(27)

目录

基于不同沉淀方法检测小鼠心脏组织中S-棕榈酰化蛋白

程炜, 占方玲, 李水明, 杨静波, 王勇, 刘宁

Figures and Tables