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引用本文:   何立勇, 俞佳乐, 李天华, 陈荣恒, 林建原, 干宁. 微流控芯片和比色法双模同时检测副溶血性弧菌和鼠伤寒沙门氏菌. 分析化学, 2021, 49(1): 50-59. doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.201354 [复制]

Citation:   HE Li-Yong , YU Jia-Le , LI Tian-Hua , CHEN Rong-Heng , LIN Jian-Yuan , GAN Ning . Simultaneous Detection of Vibrio Parahaemolyticus and Salmonella Typhimurium Based on Dual Mode Analysis Using Microfluidic Chip and Colorimetric Method. Chinese Journal of Analytical Chemistry, 2021, 49(1): 50-59. doi: 10.19756/j.issn.0253-3820.201354 [复制]

微流控芯片和比色法双模同时检测副溶血性弧菌和鼠伤寒沙门氏菌

通讯作者:  林建原, linjianyuan33@163.com; 干宁, ganning@nbu.edu.cn

收稿日期: 2020-06-18

基金项目: 国家自然科学基金项目(No.21974074)、浙江省"生物工程"一流学科开放基金项目(A类)(No.KF2019001)、宁波市高校"食品科学与工程"重点学科自设课题(No.2019FSEKDNB007)、浙江省基础公益研究计划项目(No.LGN18H300001)和浙江省大学生创新创业训练计划项目(No.S201910876019)资助。

Simultaneous Detection of Vibrio Parahaemolyticus and Salmonella Typhimurium Based on Dual Mode Analysis Using Microfluidic Chip and Colorimetric Method

Corresponding author:  LIN Jian-Yuan , linjianyuan33@163.com; GAN Ning , ganning@nbu.edu.cn

Received Date:  2020-06-18

Fund Project:  Supported by the National Natural Science Foundation of China (No.21974074).

由病原微生物引起的食源性疾病日益引起全球关注,迫切需要开发同时快速检测多种食源性致病菌的方法。本研究建立了一种基于磁性适配体捕获探针的微流控芯片-比色双模式传感器,实现了副溶血性弧菌(V.P)和鼠伤寒沙门氏菌(S.T)的快速定性和同时定量分析。此探针包括磁珠及其表面修饰的含ATP、待测物适配体及重复G碱基核苷酸片段的DNA长链。当探针和目标物结合后,会释放出上述DNA长链,形成与氯高铁血红素(Hemin)结合的G四链体,具有类过氧化物酶活性,可催化四甲基联苯胺(TMB)-H2O2体系的反应,产生肉眼可见的蓝色,实现两种致病菌的现场分析。释放的DNA长链经过EcoRV核酸内切酶剪切后,得到不同长度DNA片段,分别对应V.P和S.T的数量。在微流控芯片中分析和测定各片段,可实现两种细菌的定量分析。在最佳实验条件下,传感器对两种细菌检测的线性范围为102~107 CFU/mL,检出限可达30 CFU/mL。此传感器为现场定性筛查致病菌污染水平和实验室准确检测其含量提供了可靠的方法。

关键词:   微流控芯片, 比色分析, 滚环扩增, 三磷酸腺苷, 副溶血性弧菌, 鼠伤寒沙门氏菌, 双模检测
Key words:   Microfluidic chip, Colorimetric analysis, Rolling cycle amplification, Adenosine triphosphate, Vibrio parahaemolyticus, Salmonella typhimurium, Dual mode detection
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微流控芯片和比色法双模同时检测副溶血性弧菌和鼠伤寒沙门氏菌

何立勇, 俞佳乐, 李天华, 陈荣恒, 林建原, 干宁

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