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SPE固相萃取-液相色谱串联质谱法测定动物源食品中的氯霉素

来源:莱伯泰科 阅读数:48 时间:2021-07-12 09:54:29

前 言


氯霉素曾广泛用于治疗各种敏感菌感染,后因对造血系统有严重不良反应,故对其临床应用现已做出严格控制。氯霉素可用于有特效作用的伤寒、副伤寒和立克次体病等及敏感菌所致的严重感染。氯霉素在脑脊液中浓度较高,也常用于治疗其他药物疗效较差的脑膜炎患者。由于氯霉素可引起严重的毒副作用,所以建立一种高效、快速的定量流程及检测方法尤为重要。本文使用SPE1000全自动固相萃取系统对牛肉中的氯霉素进行固相萃取富集,用高效液相色谱质谱仪进行检测。


本文参考“农业部781号公告-2-2006 动物源食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱—串联质谱法”采用SPE1000全自动固相萃取系统,测定氯霉素的回收效果,实验证明,氯霉素回收率在90.2%~99.5%之间,重现性RSD为3.5%,回收率和重现性良好,说明SPE1000全自动固相萃取系统可靠、稳定,适用于动物源食品中的氯霉素样品前处理。


关键词:氯霉素,SPE1000全自动固相萃取系统,液相色谱串联质谱, 






实验过程


1.1仪器与试剂

SPE1000全自动固相萃取系统(莱伯泰科公司);

SCIEX 4500 液相色谱串联质谱(SCIEX);

氯霉素,100 mg/L,坛墨质检;

氯霉素D5,100 mg/L,坛墨质检;

氯化钠(分析纯);

正己烷(色谱纯);

乙酸乙酯(色谱纯);

乙腈(色谱纯);

C18固相萃取柱,(1000 mg/6 mL莱伯泰科);

实验用水:超纯水。


1.2标准工作液的配制

取1 mL氯霉素标品于10 mL容量瓶中,甲醇定容,配置成浓度为10 μg/mL的标准储备液。

取100 μL 的氯霉素标准储备液,用甲醇定容到10 mL,配制成0.1 μg/mL标准工作液。

取1 mL氯霉素D5标品于10 mL容量瓶中,甲醇定容,配置成浓度为10 μg/mL的标准储备液。

取100 μL 的氯霉素D5标准储备液,用甲醇定容到10 mL,配制成0.1 μg/mL标准工作液。


1.3试验方法

1.3.1样品准备

取均质后的样品5g置于50mL离心管中,加入内标200μL,氯霉素标液200μL,加入乙腈5mL,4%氯化钠5mL,涡旋2min,4000rad/min离心10min,取上清液至另一个50mL离心管中,重复提取一次,合并提取液。提取液中加入正己烷5mL,涡旋2min,2000rad/min离心10min,弃去上层清液,重复一次,加入水饱和乙酸乙酯5mL,涡旋1min,2000rad/min离心10min,将上层液转移到15mL离心管中,重复提取一次,合并提取液氮吹至干,用水:乙腈(95:5)5mL溶解,备用。

同时做样品空白,加入内标200μL,剩下同样品处理 。

1.3.2 固相萃取及浓缩

按照图1所示的方法进行SPE1000方法编辑,并加载方法到相应通道,进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中,氮吹浓缩至干,用1 mL流动相定容。



图1   氯霉素的SPE富集方法


1.3.3 UPLC-MS测定牛肉中氯霉素

液相条件:

色谱柱:C18,5 μm,4.6 mm*100mm; 

流    速:0.2 mL/min ;

进样量:5 μL;

流动相:乙腈:水=40:60;

MS条件:

气帘气~40       CAD~9      TEM~150      GS1~40  喷雾电压-4500V


表1  氯霉素母离子/子离子(定量例子152.0)








试验结果


2.1牛肉中氯霉素色谱图

2.1.1牛肉中氯霉素标品色谱图

图2为取200 μL的氯霉素标准工作液和200μL氯霉素内标工作液,用流动相定容到1.0 mL检测,氯霉素标品出峰色谱图,出峰时间为 1.50min。



2  氯霉素标品出峰色谱图


2.1.2牛肉中氯霉素样品色谱图

图3氯霉素加标样品出峰色谱图,出峰时间为1.50min,图4为空白样品色谱图。



3  氯霉素加标样品出峰色谱图



4   空白样品色谱图


2.2 UPLC-MS测定牛肉中氯霉素回收率

液质测定牛肉中氯霉素回收率计算结果如下表,萃取富集后的回收率在之间90.2%~99.5%,重现性RSD为3.5%。


表2  牛肉中氯霉素的加标回收率(加标量4 ug/kg)





结果与讨论



SPE1000全自动固相萃取系统净化的样品,其回收率在90.2%~99.5%,重现性为3.5%,准确度与平行性良好且自动化效率高,可应用于此类样品的前处理方法中。


参考文献

农业部781号公告-2-2006 动物源食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱—串联质谱法







关于莱伯泰科

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