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银花中多种禁用农药及相关化学品残留的测定解决方案

来源:睿科集团 阅读数:34 时间:2020-07-30 16:35:05

金银花是我国传统的药食两用中药材之一,具有清热解毒、疏风散热的功效,应用领域广泛,市场需求量大。金银花在种植过程中易染病虫害,化学农药是其防治的最主要手段。因此金银花的农药残留问题也越发引起人们的关注。由于金银花中含有挥发油、绿原酸、色素等成分,提取液不宜直接上机测试,需要经过一定的净化。

本文参照2020版《中国药典》2341通则农药残留量测定法新增第五法《药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法》中的固相萃取法,使用乙腈对金银花试样进行均质提取,经盐析和离心后,GC-MS/MS组化合物采用GCB/NH2柱净化,LC-MS/MS组化合物采用HLB柱净化,最后上机检测。

本方法采用睿科AH-30均质器进行批量提取,提取液经MPE高通量真空平行浓缩仪进行浓缩,然后用Fotector Plus全自动固相萃取仪对提取液进行净化,最后再用MPE高通量真空平行浓缩仪对洗脱液进行浓缩,实现了金银花前处理过程全流程自动化。在40 ug/kg的加标水平下GC-MS/MS法中33种化合物的回收率在71.5-118.4%之间,RSD值小于10%;在20 ug/kg的加标水平下LC-MS/MS法中30种化合物的回收率在72.1-120.5%之间,RSD值小于10%,满足实验要求。


划重点

01

仪器、试剂


1



仪器

Raykol AH-30全自动均质器

Raykol MPE-16高通量真空平行浓缩仪

Raykol Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪

Agilent 1290+6470高效液相色谱/质谱联用仪

Agilent 8890+7000D气相色谱/质谱联用仪

2



试剂

乙腈:HPLC级,甲苯:HPLC级

GC-MS/MS法33种农药混合标准储备液:40 μg/mL

LC-MS/MS法30种农药混合标准储备液:20 μg/mL

GC-MS/MS法内标使用液:磷酸三苯酯 0.1 μg/mL

GCB/NH2柱(500 mg/6 mL)

HLB柱(200 mg/6 mL)


划重点

02

样品前处理



 1  准确称取5 g试样(精确至0.01 g)于100 mL离心管中,加入1 g氯化钠后立即摇散,加入50 mL乙腈


 2  用Raykol AH-30全自动均质器在12000 r/min的搅拌速度下均质2 min,转速4000 r/min下离心5 min

AH-30全自动均质器


金银花样品的均质条件


 3  将上清液倒入浓缩杯中,残渣再加入50 mL乙腈,继续均质1 min,离心5 min


 4  合并两次提取液,在Raykol MPE-16高通量真空平行浓缩仪中浓缩至3~5 mL

 MPE-16高通量真空平行浓缩仪


金银花样品的浓缩条件



 5  放冷的样液转移至10 mL容量瓶中,用乙腈多次润洗浓缩杯并转移至容量瓶中,最终用乙腈定容至刻度


 6  GC-MS/MS法:量取上述溶液 2mL至15mL上样管中,以石墨化碳氨基复合固相萃取小柱(500 mg,6ml)为净化柱,先用10 mL乙腈-甲苯(3:1)活化小柱,弃去流出液,之后以1 mL/min的速度上样,再用2×3 mL的乙腈-甲苯(3:1)清洗样品瓶并过柱,最后用14 mL的乙腈-甲苯(3:1)洗脱,收集以上流出液,具体的固相萃取条件如下图所示。用MPE将洗脱液浓缩至近干,用乙腈转移并稀释至2 mL,混匀。精确移取1 mL上述定容液,精密加入0.3 mL磷酸三苯酯内标溶液,过0.22 μm滤膜后上气相色谱/串联质谱仪测定。

 Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪


Fotector Plus对金银花中多农残的固相萃取条件



 7  LC-MS/MS法:量取直接提取法制备的溶液3mL,通过HLB柱净化,收集全部流出液,混匀。精确移取1 mL上述净化液,精密加入0.3 mL水后过0.22 μm滤膜,上高效液相色谱/串联质谱仪测定


划重点

03

检测条件



气质联用色谱图


图-1 33种禁用农药标准品的总离子流图(1 μg/mL)



液质联用色谱图


图-2  30种禁用农药标准品的总离子流图(1 μg/mL)


划重点

04

样品测试



基质加标回收实


在金银花样品中添加浓度为40 μg/kg的33种农药(GC-MS/MS)和20 μg/kg的30种农药(LC-MS/MS)进行加标回收验证,使用上述样品前处理方法,最后分别经GC-MS/MS和LC-MS/MS检测,平均回收率和RSD结果如下所示。

表-1 GCMSMS法33种化合物的平均回收率和相对标准偏差(n=3)


表-2 LCMSMS法30种化合物的平均回收率和相对标准偏差(n=3)


划重点

05

总结


分取上清液时为防止下层残渣倒入浓缩杯中,可在浓缩杯上放置漏斗和滤纸,将上清液过滤于杯中,并用乙腈洗涤滤纸。

在减压浓缩过程中需控制好温度和压力以防止部分化合物分解和损失,温度不能超过40°C,压力不要低于80 mbar。

LC-MS/MS法需取1 mL提取液并加0.3 mL水,注意先不要将1 mL提取液装进2 mL色谱瓶中,因为提取液加了水之后会变浑浊需要过膜导致操作不便。可将1 mL提取液转移到子弹头离心管中再加入0.3 mL水,混匀后再过滤到2 mL色谱瓶中。

浓缩洗脱液时不可浓缩至干也不可残留过多洗脱液,至干会严重影响回收率,而残留过多甲苯则会在检测时产生溶剂效应。

用GCB/NH2净化时可适当增加乙腈-甲苯(3:1)的洗脱量。

由于GCB/NH2复合柱中的NH2对酸性除草剂(甲磺隆、氯磺隆和胺苯磺隆)具有很强的吸附作用,磺酰脲类除草剂的回收率非常低,因此LC-MS/MS法建议用HLB柱净化。


划重点

06

解决方案优势


本解决方案操作方便,提取、净化和浓缩效率高、回收率好。AH-30全自动均质器可自动进行中药样品的均质,且具备刀头清洗,无需人员值守,避免有机溶剂毒害,操作简单、便捷;MPE真空平行浓缩仪采用数字型的真空控制系统,能精确、实时地检测真空度,避免样液中目标物在过低真空度下损失,同时采用水浴加热和平稳的圆周震荡模式,保证样品的平行性和可靠性。Fotector Plus 高通量全自动固相萃取仪在对金银花中多农残进行固相萃取净化时,使用高精度注射器和十二通阀切换等动作,实现了活化、上样、淋洗、洗脱整个固相萃取过程的全自动化,6通道同时运行,8种溶剂可选,3种排废可选,还带有自动清洗样品瓶的功能来防止目标化合物在瓶壁上的残留,实现全自动化过程的同时保证了回收率,真正实现中药样品的大批量高效快速的前处理。