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精准测定单抗药物上的糖

来源:安捷伦科技 阅读数:107 时间:2021-05-20 12:00:10
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520 这么甜蜜的日子,你会为“糖”而烦恼嘛?如果实验室中的你还在为精准测定单抗药物上的糖而无法快速结(享)束(受)工(生)作(活),这篇文章将从一些常见的糖生物学酶说起,帮助您更好、更快速地完成实验。
内切糖苷酶可用于哪些环节?
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内切糖苷酶可将寡糖从糖蛋白及其他底物中释放出来。这些酶可用于糖蛋白的去糖基化以分析,或用于 N-糖释放后进行标记和分析。用于 N-糖分析的AdvanceBio N-糖酶(PNGase F)的裂解位点具有高度特异性。
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图 1. 选定糖苷内切酶的特异性
表 1. Gly-X 去糖基化效率
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表 2:安捷伦(ProZyme)PNGase F 酶订购信息
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*定义1U为在37°C,pH 7.5下每分钟催化 1μmol 变性的核糖核酸酶 B(ribonuclease B)释放 N-糖所需的酶量。
有时人们也会需要获得去糖基化的蛋白质以用于后续分析。GK80110 可用于去除N-糖和简单的 O-糖,GK80115 可用于去除复杂 O-糖。所以,强烈推荐您了解下,酶促去糖基化试剂盒
表 3. 酶促去糖基化试剂盒组成(GK80110+GK80115)
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  1. 外切糖苷酶中的唾液酸酶
  2. 有助于多聚糖去唾液酸化
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外切糖苷酶是一种糖苷水解酶,可酶解末端残基的糖苷键。这些酶可用于研究游离的多聚糖、糖脂和糖蛋白。针对特定结合位点的外切糖苷酶也可用于寡糖的测序。
图片图 2. 选定糖苷外切酶的特异性
高度唾液酸化可能会对蛋白表征带来困难。如测定分子量时,唾液酸会影响质谱响应。唾液酸酶从聚糖或糖蛋白上释放 α(2-3)-、α(2-6)-、α(2-8)-和 α(2-9)- 连接的 N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac, NANA)和 N -羟乙酰神经氨酸(Neu5Gc, NGNA),即可避免由于唾液酸化带来的问题。此外,唾液酸酶水解后的唾液酸也可与标记试剂反应,通过读板快速对唾液酸总量进行定量分析。
较低分子量的唾液酸酶有助于改善常规唾液酸酶空间位阻问题造成的去唾液酸化不完全情况。如果认为较低分子量的唾液酸酶有助于多聚糖去唾液酸化,可以试试唾液酸酶 A试剂盒,该试剂盒中包含 88 kDa、66 kDa 和 51 kDa 的唾液酸酶。
表 4:安捷伦唾液酸酶订购信息
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*定义 1U 为在 37℃,pH 5.5 下每分钟催化从对硝基苯基-α-D-N-乙酰基神经氨酸中释放 1μmol 对硝基苯酚所需的酶的量。
糖基转移酶将所需
多糖谱图进行“糖基化工程”
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糖基转移酶通过催化将特定单糖(游离态或附着于蛋白质、糖或脂质上)添加到现有的多聚糖结构中,每种酶类型可添加特定的单糖,具体应用例如将聚糖体外修饰为糖蛋白,以将所需的多糖谱图进行“糖基化工程”。安捷伦的唾液酸转移酶和半乳糖基转移酶也包括合适的唾液酸或半乳糖供体底物。
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图 3. 选定糖基转移酶的特异性