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水中抗生素类药物的测定

来源:莱伯泰科 阅读数:101 时间:2020-05-15 16:53:45
前言

近日,一篇关于《长江流域抗生素污染调查》的报道,长江流域抗生素浓度偏高,水生态系统受到破坏,相关调查显示,长三角约40%孕妇尿液中检出抗生素,近80%儿童尿液中检出兽用抗生素,部分检出抗生素已在临床中禁用,有可能严重损害人体免疫力。因此抗生素类药物的检测与监控越发重要。

对于水中抗生素类药物检测,固相萃取技术越来越多地得到应用,莱伯泰科公司拥有多年相关产品和技术的开发、推广和应用经验。本文使用莱伯泰科 SPE1000全自动固相萃取系统进行水源水中四环素类、头孢类和磺胺类的萃取净化,并用高效液相色谱进行检测,通过SPE1000全自动固相萃取系统建立的方法加标回收率良好,适合水源水中抗生素类药物的检测

一、水中四环素类抗生素的检测方法

1仪器设备及试剂


1.1仪器设备

SPE1000全自动固相萃取系统(莱伯泰科公司);

M64 高通道平行浓缩仪(莱伯泰科公司);

LC600 二元高压梯度高效液相色谱(莱伯泰科公司);

固相萃取柱HLB 500 mg/6 ml (莱伯泰科公司)。

1.2试剂

甲醇、乙腈(色谱纯 FISHER Chemical);

草酸、盐酸(分析纯);

Mcllvaine 缓冲溶液:将1000ml 0.1mol/L 的柠檬酸溶液与625mL 0.2mol/L 磷酸氢二钠混合;

0.1mol/LNa2EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液:称取60.5g 乙二胺四乙酸二钠放于1625mL Mcllvaine 缓冲溶液中,溶解,摇匀;

土霉素、四环素、金霉素标准物质:纯度>=95%;

土霉素、四环素、金霉素混合标准储备溶液:准确称取提土霉素、四环素、金霉素各 10mg,用甲醇定容至100ml 容量瓶中(100mg/L,甲醇);

2实验过程


2.1样品预处理

采集每500mL 水源水作为一个样品,装入SPE1000样品瓶中 ,加入250mgEDTA-Na2,20%盐酸调节PH约为2 。

2.2 SPE富集及浓缩

按照图1所示方法进行样品的SPE净化。

洗脱液收集到收集瓶中,用M64 40℃ 5psi浓缩后,用流动相定容至1mL,涡旋混匀,待检测。

                           

图1土霉素、四环素、金霉素固相萃取方法

2.3高效液相色谱检测条件

色谱柱:C18,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或性能相当者;

流动相:乙腈:甲醇:0.01mol/L草酸溶液=2:1:7;

流速:0.5mL/min;

紫外检测波长:214nm;

柱温:30℃;

进样量:20μL。

3 实验结果


3.1土霉素、四环素、金霉素混标液相色谱图


 图2为三种混标液相色谱图。

 

图2  5mg/L土霉素、四环素和金霉素液相色谱图

3.2空白样品液相色谱图

图3为空白样品液相色谱图。

图3  空白样品液相色谱图

3.3加标回收率

图4为加标样品液相色谱图,加标回收率结果如表1所示。


图4  加标样品液相色谱图

表1加标回收率结果

4 结果与讨论


本文使用SPE1000全自动固相萃取系统进行水源水中土霉素、四环素、金霉素的净化,经M64氮吹浓缩后用高效液相色谱进行检测,加标回收率为79.3%-84.7%,RSD为4.5%-6.4%,适合水源水中土霉素、四环素、金霉素的检测。


二、水中磺胺类抗生素的检测

1 仪器设备及试剂


1.1仪器设备

SPE1000全自动固相萃取系统(莱伯泰科公司);

M64 高通道平行浓缩仪(莱伯泰科公司);

LC600 二元高压梯度高效液相色谱(莱伯泰科公司);

固相萃取柱HLB 500 mg/6 ml (莱伯泰科公司)。

1.2试剂

甲醇、乙腈(色谱纯 FISHER Chemical);

乙酸、盐酸(分析纯);

0.3%乙酸水溶液(体积分数);

流动相:0.3%乙酸水溶液:乙腈=7:3(体积比);

磺胺类药物标准液:磺胺嘧啶(100μg/mL,甲醇),磺胺二甲基嘧啶(100μg/mL,甲醇),磺胺甲恶唑(100μg/mL,甲醇);

2 实验过程


2.1样品预处理

采集每500mL 水源水作为一个样品,装入SPE1000样品瓶中,加入250mgEDTA-Na2,20%盐酸调节PH约为2 。

2.2 SPE富集及浓缩

按照图1所示方法进行样品的SPE净化。

洗脱液收集到收集瓶中,用M64  40℃ 5psi浓缩后,用流动相定容至1mL,涡旋混匀,待检测。

                           


图1磺胺类抗生素固相萃取方法

2.3高效液相色谱检测条件

色谱柱:C18,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或性能相当者;

流动相:流动相:0.3%乙酸水溶液:乙腈=7:3;

流速:1.0 mL/min;

紫外检测波长:272nm;

柱温:35℃;

进样量:20μL。

3 实验结果


3.1磺胺类药物标样液相色谱图

图2为100ng/mL的磺胺类药物标样的液相色谱图。


图2 100ng/mL的磺胺类药物标样液相色谱图

3.2空白样品色谱图

图3为空白样品的色谱图,在磺胺类药物的出峰时间处没有响应,说明该样品中磺胺类药物未检出。

 


图3 空白样品色谱图

3.3加标样品色谱图

图4为加标样品的色谱图。


图4 加标样品色谱图

3.4加标回收率结果

表1为加标回收率结果,6个平行样的回收率为79.9%~87.1%,RSD为3.2%~6.7%。

表1加标回收率结果


4 结果与讨论


本文使用SPE1000全自动固相萃取系统进行水源水中磺胺类药物的萃取,经M64氮吹浓缩后用高效液相色谱进行检测,加标回收率为79.9%~87.1%,RSD为3.2%~6.7%,适合水源水中磺胺类药物的检测。


三、水中头孢类抗生素的检测


1 仪器设备及试剂


1.1仪器设备

SPE1000全自动固相萃取系统(莱伯泰科公司);

M64 高通道平行浓缩仪(莱伯泰科公司);

LC600 二元高压梯度高效液相色谱(莱伯泰科公司);

固相萃取柱HLB 1000 mg/6 ml (莱伯泰科公司)。

1.2试剂

甲醇(色谱纯 FISHER Chemical);

乙酸(分析纯);

0.1%乙酸水溶液(体积分数);

流动相:0.1%乙酸水溶液:乙腈=65:35(体积比);

头孢克洛标准液:100μg/mL,甲醇;

2 实验过程


2.1样品预处理

采集每200mL 水源水作为一个样品,装入SPE1000样品瓶中,加入250mgEDTA-Na2,20%盐酸调节PH约为2 。

2.2 SPE富集及浓缩

按照图1所示方法进行样品的SPE净化。 

洗脱液收集到收集瓶中,用M64 40℃ 5psi浓缩后,用流动相定容至1mL,涡旋混匀,待检测。

                           


图1头孢克洛固相萃取方法

2.3高效液相色谱检测条件

色谱柱:C18,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5μm,或性能相当者;

流动相:A-0.1%乙酸水,B-甲醇,A:B = 65:35;

流速:0.5mL/min;

紫外检测波长:254nm;

柱温:30℃;

进样量:20μL。

3 实验结果


3.1头孢卡洛标样液相色谱图

图2为10ng/mL的头孢卡洛的液相色谱图。


图2 10ng/mL头孢卡洛标样液相色谱图

3.2加标回收率结果

表1为加标回收率结果,6个平行样的回收率为87.5%,RSD 为7.1%。

表1加标回收率结果


4 结果与讨论


本文使用SPE1000全自动固相萃取系统进行水源水中头孢卡洛的萃取净化,经M64氮吹浓缩后用高效液相色谱进行检测,加标回收率为87.5%,RSD为7.1%,平行性良好,适合水源水中头孢类抗生素的检测。