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循环肿瘤DNA检测研究新进展
陈欢 , 韩鑫涛 , 魏佳 , 刘嘉男 , 王国庆 , 刘万建 , 田永帅 , 孟宪瑛 , 王振新
doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.211106
循环肿瘤DNA (Circulating tumor DNA,ctDNA)是源自于肿瘤的一种无细胞DNA (Cell free DNA,cfDNA),可能携带与原发肿瘤相同的致癌突变和基因改变。因此,ctDNA有望作为癌症的无创监测生物标志物。研发ctDNA分析新方法可促进用于癌症诊断、预后评估、疗效监测和遗传/表观遗传异常研究的液体活检技术的发展。在过去的几十年中,基于聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)、二代测序(Next-generation sequencing,NGS)等传统的DNA检测技术已被广泛应用于临床样本中ctDNA检测。近来,研究者针对传统DNA检测技术灵敏度较低的问题,研发了多种高性能ctDNA生物传感器用于分析癌症患者血液样本中的ctDNA,为其高灵敏检测提供了新的技术手段。本文综述了ctDNA的分析方法,尤其是近五年来ctDNA生物传感器研究的新进展,探讨了其进入实际临床应用需要解决的技术挑战,为研发癌症液体活检新方法提供了参考。
关键词: 循环肿瘤DNA, 分子标志物, 液体活检, 生物传感器, 评述
富G寡聚核苷酸修饰的金纳米粒子与细胞相互作用的研究
孙艳红 , 魏佳 , 王振新 , 孟宪瑛
doi:  10.11895/j.issn.0253-3820.181293
通过Au-S键将两种链长一致、序列不同的富鸟嘌呤(G)单链寡聚核苷酸PolyG1和PolyG2分别修饰到13 nm金纳米粒子(GNPs)表面,合成了两种单链寡聚核苷酸(ssDNAs)与GNPs复合物(PolyG1-GNPs和PolyG2-GNPs)。所合成的PolyG1-GNPs和PolyG2-GNPs在复杂分散介质中具有良好的胶体稳定性。采用紫外-可见吸收光谱、细胞透射电镜和电感耦合等离子体质谱等分析方法,考察ssDNA序列对PolyG1-GNPs和PolyG2-GNPs与细胞相互作用的影响。结果表明,PolyG1-GNPs和PolyG2-GNPs均具有较低的细胞毒性,并表现与能量相关的细胞内吞行为,ssDNA的序列决定PolyG1-GNPs和PolyG2-GNPs的细胞吞噬量及其在细胞内的分散状态,具有G4二级结构的PolyG2能够显著增加细胞对其所修饰的GNPs的吞噬量和GNPs在细胞中的稳定性。
关键词: 富G单链寡聚核苷酸, 活细胞, 金纳米粒子, 相互作用
基于基因芯片的荧光分析方法在甲状腺乳头状癌相关BRAFV600E突变高灵敏及特异性检测中的应用
魏佳 , 高嘉雪 , 王瑶琪 , 王振新 , 孟宪瑛
doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.191149
研发了一种基于DNA芯片(DNA microarray)的荧光分析方法,并将其用于检测甲状腺乳头癌相关的BRAFV600突变。本方法采用三链杂交体系,首先将单链DNA(ssDNA)捕获探针固定在微阵列芯片基底上,制备DNA芯片;以其为反应平台,加入ssDNA目标物与ssDNA捕获探针进行杂交;最后加入荧光分子Cy5的修饰ssDNA标记ssDNA目标物,检测荧光信号。在优化的实验条件下,本方法对BRAFV600E突变型ssDNA目标物的检测灵敏度达到亚纳摩尔级(0.25 nmol/L),且具有3个数量级的线性范围,并能够从突变型ssDNA目标物和野生型ssDNA目标物的混合物中区分出低至0.1%的BRAFV600E突变型ssDNA目标物。利用本方法对15例临床甲状腺组织样本的BRAFV600E突变水平进行了分析,实验结果与常规Sanger测序法检测结果一致,表明本方法具有良好的实用性。
关键词: 甲状腺乳头状癌, BRAFV600E突变, DNA芯片