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大肠杆菌胞内代谢物组学分析样品前处理条件优化
李阳 , 王继彤 , 刘晓露 , 田静 , 贾铮 , 肖志明 , 樊霞
doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.191172
建立了适用于大肠杆菌胞内代谢物组学分析的样品前处理条件。大肠杆菌菌体细胞采用冷冻盐水(0.85% NaCl,-80℃预冷15 min)进行猝灭,猝灭后的菌体细胞经过真空冷冻干燥,再通过液氮冷冻研磨结合超声裂解的方式通透细胞膜,最后采用冷甲醇-水(MeOH-H2O,1:1,V/V,4℃)提取胞内代谢物。分别采用流式细胞术检测和OD值回收率从单细胞水平和整体水平评价猝灭溶剂对大肠杆菌细胞膜损伤影响。结果表明,采用冷冻盐水猝灭大肠杆菌细胞损伤率小于5%。采用液相色谱-飞行时间质谱(T3和Hilic 2种色谱分离结合ESI±扫描模式)检测结果中低碰撞能量提取出的峰数量和总离子强度评价了3种细胞通透方式和4种提取溶剂组合的胞内代谢物提取效果。结果表明,冷冻研磨结合超声裂解通透细胞膜、冷甲醇-水提取代谢物测得的代谢物数量最多(≥ 105),并且总离子强度在最优范围(106~107)内。本研究采用冷冻干燥、冷冻研磨和超声萃取相结合的代谢物提取方式,有效促进了细胞膜裂解,提高了代谢物提取效率。本研究建立的前处理条件适用于大肠杆菌胞内代谢物组学分析。
关键词: 大肠杆菌, 胞内代谢物, 组学分析, 样品前处理
液相色谱-氢化物发生原子荧光光谱法测定饲料中砷的形态
刘成新 , 肖志明 , 贾铮 , 田静 , 刘晓露 , 樊霞
doi:  10.11895/j.issn.0253-3820.171228
建立了饲料中亚砷酸盐(As3+)、砷酸盐(As5+)、一甲基砷酸(MMA)、二甲基砷酸(DMA)、对氨基苯胂酸(p-ASA)、羟基苯胂酸(4-OH)和洛克沙胂(ROX)共7种不同形态砷的高效液相色谱-氢化物发生原子荧光光谱(HPLC-HG-AFS)分析方法。饲料样品采用甲醇-水(1:1,V/V)溶液提取,15 mmol/L(NH42HPO4和10 mmol/L邻苯二甲酸氢钾为流动相,经PRP-X100阴离子交换色谱柱分离后,由HG-AFS测定。结果表明,7种砷形态标准曲线的线性关系良好(R2≥0.9964),方法检出限为5~30 μg/kg,平均回收率为76.3%~108.1%,日内相对标准偏差≤7.7%,日间相对标准偏差≤17.4%。本方法灵敏度高、前处理简单、运行费用低廉,适用于饲料产品中砷的形态分析。
关键词: 液相色谱, 氢化物发生原子荧光光谱, 饲料, , 形态分析