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高分辨质谱-非信息依赖数据采集-后靶向筛查策略在不明原因食物中毒鉴定中的应用
张美娟 , 陈佳 , 林缨 , 张雅姣 , 郭磊 , 徐斌 , 谢剑炜
doi:  10.11895/j.issn.0253-3820.171139
基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(UPLC-QTOF MS/MS)技术,建立了高分辨质谱-非信息依赖数据采集-后靶向筛查策略(HRMS-DIA-Post targeted screening strategy),并成功应用于不明原因食物中毒患者呕吐物及粪便样本中的有毒化合物筛查鉴定。样品经溶剂提取与净化后,采用5 mmol/L甲酸铵-水(A)和0.1%甲酸-乙腈(B)作为流动相,在反相色谱柱上进行梯度洗脱。采用MSE模式对样品进行质谱(ESI+)全信息采集,经UNIFI筛查软件进行谱峰识别、谱库检索等数据分析,初筛出疑似有毒化合物α-茄碱,随后结合其化合物特征及体内代谢行为,采用后靶向筛查策略在两种样品中均鉴定出相关化合物(包括水解产物及代谢产物等),如α-卡茄碱与其水解产物β-卡茄碱、γ-茄碱/卡茄碱以及共同代谢产物茄啶。采用单点校正法测得两种样品中α-茄碱含量均约为0.1 mg/kg,采用峰面积归一化法得到两种样品中龙葵素类似物总量分别约为0.5 mg/kg与0.6 mg/kg。本研究建立的高分辨质谱快速筛查策略可为不明原因食物中毒的未知毒物快速筛查鉴定提供有效的技术手段。
关键词: 后靶向筛查, 未知有毒化合物, 高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱, 生物医学样品, 龙葵素
高效液相色谱/三重四极杆质谱联用法测定血浆和尿液中鹅膏肽类毒素
魏佳会 , 陈佳 , 吴弼东 , 陈作红 , 吴剑峰 , 谢剑炜
doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.191604
建立了高效液相色谱/三重四极杆质谱联用法测定人体血浆及尿液样本中3类5种鹅膏肽类毒素的分析方法。样品经固相萃取分离富集后,在CAPCELL CORE C18色谱柱上分离,流动相为10 mmol/L乙酸铵-甲醇,采用梯度洗脱分离,正离子多反应监测模式(MRM)检测。血浆和尿液样品中5种鹅膏肽类毒素在较宽浓度范围内均呈良好线性关系,检出限为0.2和0.5 μg/L (S/N=3);加标回收率分别为98.0%~114.6%和90.1%~99.4%,准确度、精密度及基质效应等均符合方法学要求。本方法操作简便、分析速度快、灵敏度高,并被应用于鹅膏菌中毒实际样本中鹅膏肽类毒素的检测,为中毒病人的及时救治提供了准确、可靠的技术支持。
关键词: 高效液相色谱, 质谱, 鹅膏肽类毒素, 血浆, 尿液
基于适配体的生物膜干涉检测重组人促红细胞生成素α新方法
贺小琴 , 罗黎 , 郭磊 , 谢剑炜
doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.191676
采用生物膜干涉(BLI)表面敏感光谱技术,建立了一种基于链DNA适配体39 nt的传感分析方法,实现了重组人促红细胞生成素α(EPO-α)的灵敏检测。将生物素化的39 nt固定于链霉亲和素传感芯片上,经2200 r/min高速振荡实现微升体积分析物的快速扩散。对适配体39 nt的取向、在BLI传感芯片上的固定浓度和非特异性吸附等影响因素进行了考察,发现50 nmol/L 3’末端生物素化39 nt具有最佳响应信号;加入Tween 20和牛血清白蛋白(BSA)可有效克服非特异吸附。基于麦胚凝集素构建了夹心法信号放大体系,在Tris-TB生理缓冲溶液中,检测EPO-α的线性范围为10~200 nmol/L,检出限为5 nmol/L。应用于人血浆等复杂基质中的EPO-α检测,回收率为86.7%~104.2%,RSD<11%,结果令人满意。此BLI传感体系为免标记蛋白相互作用和复杂生物样品检测等实际应用提供了有益参考。
关键词: 适配体, 重组人促红细胞生成素, 生物膜干涉, 麦胚凝集素, 信号放大