首页 杂志概况 投稿须知 在线投稿 在线阅读 征订启事 广告服务 行业资讯 企业动态 资料中心  专访报道 会展信息 ENGLISH

在线审稿投稿系统

在线阅读

搜索结果

毛细管电泳法筛选人IgG的Fc片段核酸适配体
杨歌 , 韩诗邈 , 赵丽萍 , 朱超 , 黄渊余 , 屈锋
doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.191761
基于毛细管电泳-指数富集配体系统进化技术(CE-SELEX)建立了免疫球蛋白G(IgG)的Fc片段的核酸适配体筛选方法。通过毛细管区带电泳方法分析IgG完整蛋白、Fc与Fab片段的样品的纯度、荷电性质及是否吸附的特征,并比较三者与核酸库的亲和力。结果表明,IgG与核酸库形成明显的复合物,而Fc和Fab片段与核酸库的亲和力很弱。在筛选Fc片段的适配体时,选择Fab片段作为反筛靶,对去除非特异性结合序列无显著作用。设计了针对Fc片段的适配体筛选方案,在优化的孵育条件(10 mmol/L Na2HPO4-KH2PO4 (pH 7.17),0.05 mmol/L Mg2+,37℃孵育25 min)下,经3轮筛选获得Fc片段的核酸适配体Seq Fc1-3,KD值为0.071-0.321 μmol/L,经胶体金比色分析方法验证了其亲和力与特异性。
关键词: 免疫球蛋白, 免疫球蛋白G Fc片段, 核酸适配体筛选, 毛细管电泳, 毛细管电泳-指数富集配体系统进化
毛细管电泳法筛选脱铁转铁蛋白的核酸适配体及筛选影响因素分析
杨歌 , 赵毅 , 韩诗邈 , 朱超 , 黄渊余 , 屈锋
doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.191694
核酸适配体是通过指数富集配体系统进化(SELEX)技术,在体外筛选获得的与目标分子有高亲和力与特异性的寡核苷酸序列。由于筛选过程周期长且影响因素复杂,使用常规筛选方法进行多因素影响的条件优化的工作量大,样品消耗多,目前还少有系统的研究报道。毛细管电泳(CE)具有高分辨率、快速分离、样品用量小、筛选成本低的优势,是核酸适配体筛选的有效方法。本研究以人血清中脱铁转铁蛋白(A-TF)为模式蛋白,利用CE方法研究核酸库长度、孵育温度、缓冲溶液的种类与pH值、金属离子等因素对靶蛋白与核酸库相互作用的影响。结果表明,较短序列的核酸库与靶蛋白的亲和力更高;孵育温度、缓冲液种类与pH值均影响靶蛋白与核酸复合物的形成;低浓度的K、Ca2+与Mg2+可促进复合物形成。基于优化的筛选条件,经过3轮毛细管电泳法筛选,获得了A-TF的适配体Seq A3,采用CE-LIF测得复合物的亲和常数KD=0.476 μmol/L。此适配体可用于人血清基质中A-TF的识别。
关键词: 脱铁转铁蛋白, 核酸适配体筛选, 影响因素, 毛细管电泳, 指数富集配体系统进化