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微流控芯片和比色法双模同时检测副溶血性弧菌和鼠伤寒沙门氏菌
何立勇 , 俞佳乐 , 李天华 , 陈荣恒 , 林建原 , 干宁
doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.201354
由病原微生物引起的食源性疾病日益引起全球关注,迫切需要开发同时快速检测多种食源性致病菌的方法。本研究建立了一种基于磁性适配体捕获探针的微流控芯片-比色双模式传感器,实现了副溶血性弧菌(V.P)和鼠伤寒沙门氏菌(S.T)的快速定性和同时定量分析。此探针包括磁珠及其表面修饰的含ATP、待测物适配体及重复G碱基核苷酸片段的DNA长链。当探针和目标物结合后,会释放出上述DNA长链,形成与氯高铁血红素(Hemin)结合的G四链体,具有类过氧化物酶活性,可催化四甲基联苯胺(TMB)-H2O2体系的反应,产生肉眼可见的蓝色,实现两种致病菌的现场分析。释放的DNA长链经过EcoRV核酸内切酶剪切后,得到不同长度DNA片段,分别对应V.P和S.T的数量。在微流控芯片中分析和测定各片段,可实现两种细菌的定量分析。在最佳实验条件下,传感器对两种细菌检测的线性范围为102~107 CFU/mL,检出限可达30 CFU/mL。此传感器为现场定性筛查致病菌污染水平和实验室准确检测其含量提供了可靠的方法。
关键词: 微流控芯片, 比色分析, 滚环扩增, 三磷酸腺苷, 副溶血性弧菌, 鼠伤寒沙门氏菌, 双模检测
基于卵黄抗体-金属有机框架复合探针的电化学免疫传感器快速检测金黄色葡萄球菌
王家琪 , 吴佳怡 , 林建原 , 李天华 , 李登峰 , 干宁
doi:  10.19756/j.issn.0253-3820.201566
金黄色葡萄球菌(S.aureus)污染是影响食品质量安全的重要因素,因此迫切需要开发快速、简便的现场检测食品中S.aureus的分析方法。本研究采用灭活S.aureus免疫无特定病原体(SPF)蛋鸡,从产蛋中纯化出卵黄抗体(IgY),其可以高效、特异性地捕获S.aureus。将IgY固定在丝网印刷电极表面,可用于食品中S.aureus的选择性分离富集。在UiO-66金属有机框架(MOF)材料表面共价连接二茂铁(Fc)和苯硼酸(BPA),获得了MOF@Fc-BPA复合探针。此探针与电极上的IgY共同识别并捕获S.aureus,并在电极上产生Fc的氧化还原信号。在最佳反应条件下,电化学信号强度与S.aureus浓度的对数值成正比,检测范围为10~109 cfu/mL,检出限为3 cfu/mL,检测时间为20 min。采用此传感器检测了养殖虾体内的S.aureus,检测结果与标准ELISA方法的结果一致,但检测时间明显缩短,检出限比ELISA方法低两个数量级。此传感器具有良好的现场快速筛查S.aureus的能力。
关键词: 卵黄抗体, 金黄色葡萄球菌, 二茂铁/苯硼酸-金属有机框架复合探针, 电化学免疫传感器, 现场快速检测